Tesi di dottorato

E' stato provato che l'espressione di NF-kB sia responsabile della resistenza agli agenti antineoplastici e che sembra giocare un ruolo nell'attivazione della via di segnale a valle del recettore dell'EGF nel carcinoma del colon-retto. Inoltre abbiamo voluto verificare la possibile amplificazione del gene dell'EGFR attraverso tecnica CISH e FISH in risposta alla terapia. La CISH infatti sembra essere capace di fornire informazioni su il GCN EGFR accurate quanto quelle fornite dalla FISH con il vantaggio di essere una tecnica più affidabile e riproducibile che richiede l'immunoistochimica e un microscopio ottico. Lo scopo della nostra analisi è stato quello di individuare una correlazione tra l'espressione di NF-kB, il tasso di risposta, il tempo di progressione e la sopravvivenza e un'altra tra il GCN EGFR della CISH, la percentuale di risposta, il tempo di progressione (TTP) e la sopravvivenza globale (OS) nei pazienti con carcinoma del colon-retto in stadio avanzato risultati refrattari all'Irinotecan e trattati poi con Cetuximab-Irinotecan.

Pazienti e metodi
Abbiamo analizzato in modo retrospettivo l'immunoreattività di NF-kB e il valore di GCN EGFR con tecnica CISH in pazienti risultati refrattari all'Irinotecan e poi trattati con Cetuximab-Irinotecan. Per individuare l'amplificazione del gene dell'EGFR sono state eseguite la CISH e la FISH su sezioni di tessuto incluso in paraffina utilizzando delle sonde marcate con cromogeno e sostanza fluorescente rispettivamente. Per stimare il CISH GCN EGFR è stato stabilito, con ROC (Receiverun Operatine Characteristic) analysis, un valore cut-off di 2.3.
Per studiare il confronto tra la CISH e la FISH sono stati utilizzati due test statistici il T-Test e il Wilcoxon Signed Ranks Test Test.

Risultati
Sono stati analizzati 76 pazienti. Il Cetuximab e l'Irinotecan sono stati somministrati come chemioterapia di seconda linea a 19 pazienti e nei restanti 57 dopo più di 2 linee di chemioterapia.
Abbiamo osservato una risposta parziale (PR) in 16 pazienti per un tasso di risposta del 24%. 32 pazienti (48%) hanno presentato progressione della malattia; il tempo mediano della progressione (TTP) è stato di 3.6 mesi e la sopravvivenza globale mediana di 10.3 mesi. NF-kB è risultato positivo in 46 pazienti (60%). Tutte le principali caratteristiche cliniche erano ben equilibrate tra i pazienti NF-kB positivi e NF-kB negativi.
Il tasso di risposta è stato del 10% (4 pazienti) rispetto al 48% (12 pazienti; p=,0007) nei tumori NF-kB positivi e negativi rispettivamente.
TTP mediano nei pazienti NF-kB positivi è stato di 3 vs 6.4 mesi per i restanti pazienti (p=,021).
La sopravvivenza mediana globale era di 9.5 contro i 15.8 mesi per pazienti NF-kB positivi e NF-kB negativi rispettivamente (p=,036).
Con la CISH invece sono stati analizzati 43 pazienti. 14 pazienti hanno ricevuto Cetuximab-Irinotecan come trattamento di seconda linea, 29 di essi invece sono stati trattati dopo il fallimento di osserva una parziale remissione in 10 pazienti (23%), TTP mediano di 3.6 mesi e la sopravvivenza globale di 10.6 mesi.
Venticinque pazienti (58%) hanno mostrato un CISH GCN EGFR maggiore o uguale a 2.3, 18 casi invece un CISH GCN EGFR minore o ugale a 2.3. Abbiamo osseravto una parziale remissionein 9/25 (38%) casi e 1/18 (6%) casi con CISH GCN EGFR maggiore o uguale a 2.3 e minore o uguale 2.3 rispettivamente (p=0,02). Il TTP mediano è risultato di 5.2 mesi in pazienti che mostravano un incremento di CISH GCN EGFR mentre è stato di 3.1 mesi in quelli con un basso CISH GCN EGFR (p=0.01). La OS mediana è risultata di 10.6 e 9.8 mesi in pazienti con aumento e diminuzione di EGFR GCN rispettivamente (p=0.6).
Per il confronto CISH-FISH sono stati analizzati 38 pazienti di cui 2 colpiti anche da metastasi; di questi 18 (47.4%) erano femmine e 20 (52.6%) erano maschi.
Con il T-Test abbiamo eseguito 40 osservazioni ed è risultata una correlazione di 0.794 e Wilcoxon Signed Ranks Test si è due variabili dello 0.548. Appaiando i dati è risultata una T-student di 0.794 e p=0.432.
Studiando il confronto delle medie con il Wilcoxon Signed Ranks Test si è dimostrato che non c'è differenza di significatività tra i valori osservati con le due metodiche, infatti con una concordanza del 100% di amplificazione abbiamo ottenuto un Z=0.087 e una p=0.931.

Conclusioni
La differenza tra il TTP mediano, la sopravvivenza globale e il tasso di risposta sembrano confermare che NF-kB può svolgere un ruolo cruciale nel predire l'efficacia di Cetuximab e Irinotecan nel tumore del colon-retto in stadio avanzato.
Il valore CISH EGFR GCN può rappresentare un mezzo efficace per selezionare i pazienti affetti da carcinoma del colon-retto per la terapia Cetuximab e in più può essere correlato alla percentuale di risposta, al tempo di progressione (TTP) e alla sopravvivenza globale (OS).