Tesi di dottorato

Con il presente studio si è voluto applicare le tecniche della coltivazione in vitro a quattro specie di interesse per il vivaismo locale marchigiano. Queste specie sono state: un ecotipo locale di carciofo (Cynara cardunculus var. scolymus L.) il 'Carciofo di Montelupone'; una cultivar di lampone (Rubus idaeus L.) var. Rossana; e due aromatiche quali l'origano (Origanum vulgare L.) e la salvia (Salvia officinalis L.). Da quanto emerso dallo studio sono stati sintetizzati quattro protocolli di micropropagazione, uno per ciascuna specie studiata, con i quali si è cercato di ottenere il più efficiente e semplice e sicuro metodo di rapida propagazione di specie di interesse locale al fine di ottenere del materiale che risponda a caratteristiche genetiche, sanitarie e di uniformità richieste per le produzioni vivaistiche all'ingrosso e per la ricoltivazione. Relativamente al carciofo il protocollo messo a punto prevede degli espianti di 2-4 cm dai carducci dal pieno campo e quindi il prelievo dallo stesso dei meristemi apicali dopo una sterilizzazione al 2% di cloro attivo per 20 minuti, gli espianti così ottenuti sono avviati alla coltura in vitro su substrato di coltura secondo Murashige e Skoog, 1962 (MS) addizionato di 0,25 mg/l di 6-BAP, gli espianti sani e vitali sono stati poi avviati alla fase di proliferazione con lo stesso substrato addizionato con diverse concentrazioni di citochinina, la più efficiente per questa specie si è rivelata essere 0,5 mg/l più 0,2 mg/l di acido indol butirrico (IBA). La concentrazione dell'agente gelificante, agar, è stata aumentata a 8 mg/l per ovviare a problemi di vitrescenza. Per la fase di radicazione i migliori risultati si sono ottenuti eliminando la citochinina dal substrato dell'ultima subcoltura lasciando solo 0,2 mg/l di IBA. Con subcolture di 20 giorni si è ottenuto un tasso di proliferazione superiore a 2. Le fasi sensibili per questa coltura sono risultate la scelta dell'espianto ed il prelievo del meristema, inoltre, per questa specie, la tecnica è risultata prevalentemente utile per la produzione delle piante madri sane e certificate da destinare poi alla produzione di carducci con metodo tradizionale. Il protocollo relativo al lampone prevede l'espianto dei meristemi da gemme prelevate dal pieno campo e sterilizzate con soluzione di ipoclorito di sodio e acqua al 2% di cloro attivo per 20 minuti, quindi il trasferimento in vitro su substrato di MS addizionato di 0,25 mg/l di 6-BAP ottenendo tassi di proliferazione di 2,4 con tempi di subcoltura di 20 giorni. Per la radicazione è sufficiente un ultimo trasferimento in substrato MS senza fitoregolatori. Questo protocollo è risultato valido per una produzione di piantine finite per la vendita. Riguardo alla salvia il protocollo prevede una sterilizzazione su microtalee di 1 cm di lunghezza con ipoclorito di sodio al 2% di cloro attivo per 20 minuti, quindi la proliferazione migliore si ottiene con substrato di MS addizionato con 0,25 mg/l di 6-BAP e l'aumento a 8 mg/l di agar per evitare fenomeni di vitrescenza, il tasso di proliferazione rilevato è superiore a 3. La radicazione si è rilevata leggermente difficoltosa in quanto la semplice eliminazione della citochinina non ha stimolato la radicazione in modo efficiente soprattutto nella sopravvivenza in fase d'ambientamento. Dalle ricerche effettuate l'utilizzo di carbone attivo e l'allungamento del tempo d'ambientamento dai 20 giorni a 30 da risultati molto positivi. I risultati ottenuti dalla sperimentazione effettuata con l'origano confermano quanto disponibile in bibliografia. Infatti, risultati positivi di sterilizzazioni sono stati ottenuti solo utilizzando semi trattati con ipoclorito di sodio allo 0,5% di cloro attivo, per 5 minuti, e poi trasferiti su substrato di proliferazione MS con aggiunta di 0,25 mg/l di 6-BAP, il quale permette di ottenere un tasso di proliferazione pari a 5. La radicazione è relativamente semplice in quanto è sufficiente allungare il tempo dell'ultima subcoltura di 7gg per ottenere una radicazione del 100%. In generale, per le diverse specie si può confermare la versatilità della tecnica e dei componenti usati soprattutto per quanto riguarda la composizione di macro-microelementi e vitamine MS dei substrati di proliferazione e radicazione, che sono risultati idonei per le diverse specie. Questa esperienza è risultata utile ai fini preposti dalla tesi, le tecniche approfondite ed i protocolli definiti sono risultati utili come supporto al vivaismo sia per quanto riguarda la produzione direttamente dal laboratorio ma anche per la produzione di piante madri risanate da avviare alla coltivazione in pieno campo.